Kit ELISA CHO HCP
En este ensayo se utiliza un método ELISA inmunoabsorbente de un solo paso.Las muestras que contienen CHOK1 HCP reaccionan simultáneamente con el anticuerpo anti-CHOK1 de cabra marcado con HRP y el anticuerpo anti-CHOK1 recubierto en la placa ELISA, formando finalmente un complejo tipo sándwich de anticuerpo en fase sólida-anticuerpo marcado con HCP.El antígeno-anticuerpo no unido se puede eliminar lavando la placa ELISA.El sustrato TMB se agrega al pocillo para que la reacción sea suficiente.El desarrollo del color se detiene después de agregar la solución de parada y se lee la DO o el valor de absorbancia de la solución de reacción a 450/650 nm con un lector de microplacas.El valor de DO o valor de absorbancia es proporcional al contenido de HCP en la solución.A partir de esto, se puede calcular la concentración de HCP en la solución según la curva estándar.
Solicitud
Este kit se utiliza para detectar cuantitativamente el contenido de residuos de proteínas de la célula huésped CHOK1 en muestras.
Coponentes
| S/N | Componente | Concentración | Condiciones de almacenaje |
| 1 | Estándar CHOK1 HCP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, proteger de la luz |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, proteger de la luz |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | detener la solución | NA | RT |
| 6 | Selladores de microplacas | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Placas de prerrecubrimiento de alta adsorción | NA | 2-8℃ |
Equipamiento requerido
| Consumibles / Equipos | Fabricar | Catalogar |
| Lector de microplacas | Dispositivos moleculares | Spectra Max M5, M5e o equivalente |
| termomezclador | Eppendorf | Eppendorf/5355 o equivalente |
| Mezclador Vortex | ICA | MS3 Digital o equivalente |
Almacenamiento y estabilidad
1.Transporte a -25~-15°C.
2.Las condiciones de almacenamiento son las que se muestran en la Tabla 1;Los componentes 1-2 se almacenan ≤–20°C, 5-6 se almacenan a temperatura ambiente, 3、4、7、8 se almacenan a 2-8 ℃;el período de validez es de 12 meses.
parametros del producto
1.Sensibilidad: 1 ng/mL
2.Rango de detección: 3- 100 ng/ml
3.Precisión: CV intraensayo≤ 10%, CV interensayo≤ 15%
4.Cobertura de profesionales sanitarios: >80 %
5.Especificidad: Este kit es universal ya que reacciona específicamente con CHOK1 HCP independientemente del proceso de purificación.
Preparación de reactivos
1.PBST 0,05%
Tomar 15 ml de 20×PBST 0,05%, diluido en ddH2O, y completar hasta 300 ml.
2.1,0% BSA
Tomar 1 g de BSA del frasco y diluir en 100 ml de PBST al 0,05%, mezclar bien hasta su completa disolución y conservar a 2-8°C.El tampón de dilución preparado tiene una validez de 7 días.Se recomienda preparar según sea necesario.
3.Solución de detección 2μg/mL
Tome 48 μl de 0,5 mg/ml de Anti-CHO HCP-HRP y dilúyalos en 11 952 μl de BSA al 1 % para obtener una concentración final de solución de detección de 2 μg/ml.
4.Control de calidad y preparación de estándares CHOK1 HCP
| Tubo No. | Original | Concentración | Volumen | 1%BSA | volumen total | Final |
| A | Estándar | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabla: Preparación de CC y estándares
Procedimiento de ensayo
1.Prepare los reactivos como se indica en "Preparación de los reactivos" más arriba.
2.Tome 50 μl de estándares, muestras y controles de calidad (consulte la Tabla 3) en cada pocillo y luego agregue 100 μl de solución de detección (2 μg/ml);Cubrir la placa con sellador y colocar la placa ELISA en la termomezcladora.Incubar a 500 rpm, 25 ± 3 ℃ durante 2 horas.
3.Invierta la microplaca en el fregadero y deseche la solución de recubrimiento.Pipetee 300μL de PBST 0,05% en cada pocillo para lavar la placa ELISA y desechar la solución, y repita el lavado 3 veces.Invierta el plato sobre una toalla de papel limpia y séquelo.
4.Agregue 100 μl de sustrato TMB (consulte la Tabla 1) a cada pocillo, selle la placa ELISA e incube en la oscuridad a 25 ± 3 ℃ durante 15 min.
5.Pipetee 100 μl de solución de parada en cada pocillo.
6.Mida la absorbancia a una longitud de onda de 450/650 nm con un lector de microplacas.
7.Analizar datos mediante SoftMax o software equivalente.Trazar la curva estándar utilizando un modelo de regresión logística de cuatro parámetros.
Ejemplo de curva estándar
NOTA: Si la concentración de HCP en la muestra excede el límite superior de la curva estándar, es necesario diluirla adecuadamente con tampón de dilución antes de realizar la prueba.
NOTAS
La solución de parada es ácido sulfúrico 2 M. ¡Manipúlelo con cuidado para evitar salpicaduras!
