ADNasa I
La ADNasa I (desoxirribonucleasa I) es una endodesoxirribonucleasa que puede digerir ADN monocatenario o bicatenario.Reconoce y escinde enlaces fosfodiéster para producir monodesoxinucleótidos u oligodesoxinucleótidos monocatenarios o bicatenarios con grupos fosfato en el terminal 5' e hidroxilo en el terminal 3'.La actividad de la DNasa I depende del Ca2+ y puede ser activada por iones metálicos divalentes como Mn2+ y Zn2+.Ca2+ 5 mM protege la enzima de la hidrólisis.En presencia de Mg2+, la enzima podría reconocer y escindir aleatoriamente cualquier sitio en cualquier cadena de ADN.En presencia de Mn2+, las dobles hebras de ADN pueden reconocerse y escindirse simultáneamente casi en el mismo sitio para formar fragmentos de ADN con extremos planos o fragmentos de ADN con extremos pegajosos con 1-2 nucleótidos que sobresalen.
Propiedad del producto
La ADNasa I del páncreas bovino se expresó en un sistema de expresión de levadura y se purificó.
Coponentes
| Componente | Volumen | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| ADNasa I, libre de ARNasa | 20μL | 200μL | 1ml | 10ml |
| 10 × tampón ADNasa I | 1ml | 1ml | 5× 1ml | 5× 10 ml |
Transporte y almacenamiento
1. Estabilidad de almacenamiento: – 15 ℃ ~ -25 ℃ para almacenamiento;
2.Estabilidad del transporte: Transporte bajo bolsas de hielo;
3. Se suministra en: Tris-HCl 10 mM, CaCl 2 mM2, 50% glicerol, pH 7,6 a 25 ℃.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que degradará completamente 1 µg de ADN de pBR322 en 10 minutos a 37°C.
Control de calidad
ARNasa:5U de DNasa I con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ no producen degradación, según lo determinado por electroforesis en gel de agarosa.
Bacteriano Endotoxina:Prueba LAL, según la Farmacopea China IV edición 2020, método de prueba de límite de gel, regla general (1143).El contenido de endotoxinas bacterianas debe ser ≤10 UE/mg.
Instrucciones de uso
1.Prepare la solución de reacción en el tubo libre de RNasa según las proporciones que se enumeran a continuación:
| Componente | Volumen |
| ARN | X µg |
| 10 × tampón ADNasa I | 1 µL |
| ADNasa I, libre de ARNasa (5U/μL) | 1 U por μg de ARN |
| ddH2O | Hasta 10 µL |
2,37 ℃ durante 15 minutos;
3.Agregue el tampón de terminación para detener la reacción y caliente a 65 ℃ durante 10 minutos para inactivar la ADNasa I. La muestra se puede usar directamente para el siguiente experimento de transcripción.
Notas
1.Utilice 1U de ADNasa I por μg de ARN, o 1U de ADNasa I por menos de 1 μg de ARN.
2.Se debe agregar EDTA hasta una concentración final de 5 mM para proteger el ARN de la degradación durante la inactivación de la enzima.
