5×Premezcla Neoscript Fast RT-qPCR plus-UNG

Número de gato: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) es una mezcla altamente estable basada en sonda de un solo tubo adecuada para transcripción inversa de un solo paso y PCR cuantitativa (qRT-PCR).Admite la premezcla de cebadores y sondas y se mantiene estable después de un almacenamiento prolongado a baja temperatura.La muestra a analizar se puede agregar directamente durante el uso, sin necesidad de una operación adicional de apertura del tubo o pipeteo.Este producto proporciona componentes, por ejemplo, ADN polimerasa de arranque en caliente, M-MLV, uracilo ADN glicosilasa termolábil (TS-UNG), inhibidor de ARNasa, MgCl.₂, dNTP (con dUTP en lugar de dTTP) y estabilizadores.Con la transcriptasa inversa de amplificación rápida y la ADN polimerasa genéticamente modificadas, es posible completar la amplificación por PCR en 20 a 40 minutos.Este reactivo utiliza un tampón especial para qPCR con enzimas mixtas de enzima de amplificación antiinhibitoria y enzima UNG.Por lo tanto, puede obtener una buena amplificación de los genes diana y prevenir la falsa amplificación causada por la contaminación residual y por aerosoles de la PCR.Este reactivo es compatible con la mayoría de los instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia de fabricantes como Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad y Roche.

Componente

1.25×Mezcla Neoscript Fast RTase/UNG

2.5×Búfer de premezcla Neoscript Fast RT (dUTP)

Condiciones de almacenaje

Todos los componentes deben mantenerse a -20 ℃ para almacenamiento a largo plazo y a 4 ℃ por hasta 3 meses.Mezcle bien después de descongelar y centrifugar antes de usar.Evite las frecuentes heladas y descongelaciones.

Preparación del sistema de reacción qRT-PCR

1) a. La concentración final del cebador suele ser de 0,2 μM.Para obtener mejores resultados, la concentración del cebador se puede optimizar dentro del rango de 0,2 a 1 μM.Generalmente, la concentración de la sonda se puede optimizar dentro del rango de 0,1-0,3 μM.

2) b. Cuando se utiliza un procedimiento de PCR rápido, aumentar la concentración de cebadores y sondas puede dar como resultado mejores resultados de amplificación y su proporción debe optimizarse en consecuencia.

3) Los diferentes tipos de muestras contienen diferentes tipos y contenidos de inhibidor y número de copias del gen diana.El volumen de la muestra debe considerarse según la condición real.Haga una dilución de la muestra con agua libre de nucleasas o tampón TE, si es necesario.

Reacción Ccondiciones

Control de calidad

1.Detección de funciones: sensibilidad, especificidad y repetibilidad de qPCR.

2.Sin actividad de nucleasa exógena: sin endonucleasa exógena ni contaminación por exonucleasa.

Notas

1.La tasa de amplificación de la ADN polimerasa rápida no es inferior a 1 kb/10 s.Los diferentes instrumentos de PCR tienen diferentes velocidades de calentamiento y enfriamiento, modos de control de temperatura y conductividad térmica y, por lo tanto, es esencial optimizar la concentración de cebador/sonda y el método de funcionamiento en combinación con su instrumento de PCR rápido específico.

2.Este producto tiene una amplia aplicabilidad y es adecuado para el diagnóstico molecular de alta sensibilidad.Se recomienda el método de PCR de tres pasos para cebadores con baja temperatura de hibridación o para la amplificación de fragmentos largos de más de 200 pb.

3.Dado que diferentes amplicones tienen diferente eficiencia de utilización de dUTP y diferente sensibilidad a UNG, los reactivos deben optimizarse si la sensibilidad de detección disminuye cuando se utiliza el sistema UNG.Por favor contáctenos para soporte técnico si es necesario.

4.Para evitar la amplificación de productos de PCR remanentes, se requiere un área experimental y una pipeta dedicadas a la amplificación.Opere con guantes y cámbielos con frecuencia y no abra el tubo de PCR después de la amplificación.