ADNasa I (Libre de ARNasa)(5u/ul)
Número de gato: HC4007A
La ADNasa I (desoxirribonucleasa I) es una endodesoxirribonucleasa que puede digerir ADN monocatenario o bicatenario.Reconoce y escinde enlaces fosfodiéster para producir monodesoxinucleótidos u oligodesoxinucleótidos monocatenarios o bicatenarios con grupos fosfato en el terminal 5' e hidroxilo en el terminal 3'.La actividad de la DNasa I depende del Ca.2+y puede ser activado por iones metálicos divalentes como Mn2+y zinc2+.Ca 5 mm2+protege la enzima de la hidrólisis.En presencia de Mg2+, la enzima podría reconocer y escindir aleatoriamente cualquier sitio en cualquier cadena de ADN.En presencia de Mn2+, las dobles hebras de ADN pueden reconocerse y escindirse simultáneamente casi en el mismo sitio para formar fragmentos de ADN de extremos planos o fragmentos de ADN de extremos pegajosos con 1-2 nucleótidos que sobresalen.
Componentes
| Nombre | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| ADNasa I, libre de ARNasa | 20μL | 200μL | 1ml | 10ml |
| 10 × tampón ADNasa I | 1ml | 1ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Condiciones de almacenaje
-25 ℃ ~ -15 ℃ para almacenamiento;Transporte bajo bolsas de hielo.
Instrucciones
1. Prepare la solución de reacción en el tubo libre de RNasa según las proporciones que se enumeran a continuación:
| Componente | Volumen |
| ARN | X µg |
| 10 × tampón ADNasa I | 1μL |
| ADNasa I, libre de ARNasa (5U/μL) | 1 U por µg de ARN① |
| ddH2O | Hasta 10μL |
Nota: ①Calcule el volumen de DNasa I que debe agregarse en función de la cantidad de ARN.
2, 37 ℃ durante 15 minutos;
3. Agregue EDTA 0,5 M a la concentración final de 2,5 mM ~ 5 mM y caliente a 65 ℃ durante 10 minutos para detener la reacción.La muestra se puede utilizar directamente para la siguiente reacción, como la transcripción inversa.experimento.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que degradará completamente 1 µg de pBR322.ADN en 10 minutos a 37 ℃.
Control de calidad
ARNasa:5U de ADNasa I con 1,6 µg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ no producen degradación comodeterminado por electroforesis en gel de agarosa.
Notas
1. Prepare 0,5 MEDTA usted mismo.
2. Utilice 1U de ADNasa I por µg de ARN.Sin embargo, si el ARN es inferior a 1 µg, utilice 1U de ADNasa I.
3. Coloque la enzima en hielo durante el funcionamiento.
