Superstart qPCR Premix plus-UNG
Número de gato: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG es un reactivo especializado diseñado para reacciones cualitativas y cuantitativas de PCR en tiempo real mediante detección basada en sondas, desarrollado específicamente para procesos de liofilización.Contiene una nueva enzima de inicio en caliente Hotstart Taq plus (DG), que tiene su actividad enzimática Taq sellada a temperatura ambiente, inhibiendo eficazmente la amplificación no específica causada por el recocido no específico del cebador o la formación de dímeros del cebador en condiciones de baja temperatura, mejorando así la especificidad de la reacción de amplificación.Este reactivo utiliza un tampón específico de qPCR optimizado y un sistema anticontaminación UNG/dUTP para lograr un arranque en caliente rápido, lo que mejora en gran medida la eficiencia y la sensibilidad de las reacciones de qPCR.Puede obtener buenas curvas estándar en una amplia gama de áreas de cuantificación y realizar la cuantificación con precisión, evitando eficazmente la amplificación de falsos positivos causada por productos de PCR residuales o contaminación por aerosoles.Este reactivo es compatible con la mayoría de los instrumentos de PCR cuantitativos fluorescentes de fabricantes como Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad y Roche, etc., y presenta una buena estabilidad en forma liofilizada.
Composición del reactivo
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG)
2. MgCl 250 mM2
3. 4×lioprotector (opcional)
Condiciones de almacenaje
Almacenamiento a largo plazo a -20 ℃;Se puede almacenar a 4 ℃ por hasta 3 meses.Mezclar bien antes de usar yEvite la congelación y descongelación repetidas.
Protocolo de ciclismo
| Procedimiento | Temperatura. | Tiempo | Ciclo |
| Digestión | 50 ℃ | 2 minutos | 1 |
| Activación de la polimerasa | 95 ℃ | 1~5 minutos | 1 |
| Desnaturalizar | 95 ℃ | 10~20 segundos | 40-50 |
| Recocido y Extensión | 56~64℃ | 20~60 segundos | 40-50 |
qPCR reacción líquida SyPreparación del tallo
|
Composición |
Volumen de 25 µL |
Volumen de 50 µL |
Concentración final |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(mg2+gratis) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| MgCl 250 mM2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mm |
| 4×lioprotector1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Mezcla de cebador y sonda2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Plantilla de ADN3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Hasta 25 µL | Hasta 50 µL | —— |
1. Una concentración final de 0,2 μM para los cebadores suele dar buenos resultados;cuando el rendimiento de la reacción sea deficiente, ajuste la concentración del cebador dentro del rango de 0,2-1 μM según sea necesario.La concentración de la sonda normalmente se optimiza dentro del rango de 0,1 a 0,3 μM mediante experimentos de gradiente para encontrar combinaciones óptimas.
2. El número de copias de genes diana contenidos en diferentes tipos de plantillas varía;si es necesario, se puede realizar una dilución en gradiente para determinar la cantidad óptima de adición de plantilla.
3. Este sistema puede liofilizarse;cuando los clientes usan este sistema sin requisitos de liofilización, se puede agregar 4 × lioprotector de forma selectiva; si se requieren productos liofilizados, durante la validación del rendimiento del producto en la etapa de reactivos líquidos, se debe agregar 4 × lioprotector para garantizar la coherencia con los componentes del sistema liofilizado. y efectos.
Cuando se utiliza el sistemad para liofilización, prepare el sistema as siguiente:
| Composición | 25µL Sistema de reacción |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG) | 5 µL |
| MgCl 250 mM2 | 0,45 µL |
| 4×lioprotector | 6,25 µL |
| 25×Mezcla de cebador y sonda | 1 µL |
| ddH2O | Hasta 18~20 µL |
* Si se necesitan otros sistemas de liofilización, consultar por separado.
Proceso de liofilizaciónss
| Procedimiento | Temperatura. | Tiempo | Condición | Presión |
| Precongelación | 4 ℃ | 30 minutos | Sostener |
1 atmósfera |
| -50 ℃ | 60 minutos | Enfriamiento | ||
| -50 ℃ | 180 minutos | Sostener | ||
| Secado primario | -30 ℃ | 60 minutos | Calefacción |
Vacío definitivo |
| -30 ℃ | 70 minutos | Sostener | ||
| Secado secundario | 25 ℃ | 60 minutos | Calefacción |
Vacío definitivo |
| 25 ℃ | 300 minutos | Sostener |
2. El proceso de liofilización anterior es sólo como referencia.Diferentes tipos de productos y diferentes liofilizadores tienen diferentes parámetros, por lo que se pueden realizar ajustes de acuerdo con las condiciones reales.condiciones durante el uso.
3. Pueden ser adecuados diferentes procesos de liofilización para diferentes tamaños de lotes de liofilizado.productos, por lo que se deben realizar suficientes pruebas de validación cuando se utilizan para producción a gran escala.
Instrucciones para usar liofilizar.polvo
1. Centrifugar brevemente el polvo liofilizado;
2. Agregue la plantilla de ácido nucleico al polvo liofilizado y agregue agua hasta 25 µL;
3. Mezclar bien mediante centrifugación y ejecutar en máquina.
Control de calidad:
1. Pruebas funcionales: sensibilidad, especificidad, reproducibilidad de qPCR.
2. Sin actividad de nucleasa exógena, sin contaminación endo/exonucleasa exógena.
Información técnica:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG utiliza una nueva enzima de arranque en caliente que permite un arranque en caliente rápido en 1 a 5 minutos;Gracias a una formulación de tampón especial, es adecuado para reacciones de PCR cuantitativas fluorescentes múltiples.
2. Tiene una mayor especificidad que mejora significativamente la sensibilidad de la detección del límite de PCR cuantitativa de fluorescencia, lo que hace que las curvas de amplificación se normalicen, el valor de fluorescencia obtiene una mejora obvia en plantillas de baja concentración, adecuados como reactivos de detección de PCR cuantitativa de fluorescencia de alta sensibilidad.
3. Para cebadores con temperatura de recocido más baja o fragmentos de más de 200 pb, se recomienda el método de 3 pasos.
4. La eficiencia de utilización de dUTP y la sensibilidad a la enzima UNG difieren para diferentes genes objetivo; por lo tanto, si el uso del sistema UNG produce una disminución en la sensibilidad de detección, el sistema de reacción debe ajustarse y optimizarse.Si necesita soporte técnico, comuníquese con nuestra empresa.
5. Utilice áreas y pipetas dedicadas antes y después de la amplificación, use guantes durante la operación y reemplácelos con frecuencia;No abra el tubo de reacción una vez finalizada la PCR para minimizar la contaminación de las muestras por los productos de la PCR.
