Premezcla RT-qPCR multiplex de un paso
Descripción
Número de gato: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix es un kit de PCR cuantitativa multiplex basado en ARN como plantilla.En el experimento, la transcripción inversa y la PCR cuantitativa se realizan en el mismo tubo de reacción, simplificando la operación experimental y reduciendo el riesgo de contaminación.El diseño exclusivo de la mezcla de tampón y enzima se puede utilizar en un sistema liofilizado de un solo paso.El kit utiliza transcriptasa inversa resistente al calor para la síntesis eficiente del ADNc de la primera cadena utilizando la ADN polimerasa Taq hotstart para la amplificación cuantitativa.Contiene tampón de reacción optimizado, mezcla de enzimas, etc., y se agregaron factores que inhiben eficazmente la amplificación por PCR no específica y mejoran la eficiencia de amplificación de múltiples reacciones de qPCR, lo que permite una amplificación cuantitativa de fluorescencia múltiple al tiempo que garantiza la eficiencia de amplificación de los cebadores.
Componentes
| Nombre |
| 1. Lyo-Buffer |
| 2. Mezcla de lyoenzimas |
| 3. Protector lyo |
Condiciones de transporteion
R: Lyo-buffer y protector: -25~-15℃, la vida útil es de 1 año.
B: Mezcla de lyoenzimas, 2-8 ℃, vida útil de 6 meses.
Instrucción para la operación
1. Sistema de reacción (tome 25 μl como ejemplo)
| Componentes | Volumen (μL) | Concentración final |
| Lyo-Buffer | 6 | 1* |
| Mezcla de Lyo-Enzima | 1 | - |
| Lyoprotector | 8 | - |
| Mezcla de imprimación (10 μM) | 1 | 0,1-1 µM |
| Mezcla de sonda (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 µM |
| Plantilla de ARN | 5 | - |
| DEPC H2O | Hasta 25 | - |
2. Protocolo de ciclismo optimizado
1) Protocolo de ciclismo estándar
| Etapa de reacción | Temperatura | Tiempo | Ciclo | |
| 1 | Transcripción inversa | 50°Ca | 10 minutos | 1 |
| 2 | Desnaturalización inicial | 95ºC | 5 minutos | 1 |
| 3 | Reacción de amplificación | 95ºC | 15 segundos | 45 ciclos |
| 60°Cb | 30 segundosc |
2) Protocolo de ciclo rápido
|
| Etapa de reacción | Temperatura | Tiempo | Ciclo |
| 1 | Transcripción inversa | 50°Ca | 2 minutos | 1 |
| 2 | Desnaturalización inicial | 95ºC | 2 segundos | 1 |
| 3 | Reacción de amplificación | 95ºC | 1 segundo |
45 ciclos |
| 60°Cb | 13 segundosc |
Nota:
a) Contrarrestar transcripción: La temperatura puede seleccionar 42°C o 50°C durante 10-15 minutos.
b) Reacción de amplificación: La temperatura se ajusta según el valor de Tm de los cebadores diseñados.
C)Fluorescencia señal adquisición: Configure el procedimiento experimental de acuerdo con los requisitos delmanual del instrumento.
Información técnica/Especificaciones
| Arranque en caliente | Arranque en caliente incorporado |
| Método de detección | Detección de sonda cebadora |
| método de PCR | RT-qPCR de un paso |
| tipo de muestra | ARN |
Notas
1. Este producto es únicamente para uso en investigación.
2. ¡Use el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad!
