Nasa A
La ribonucleasa A (RNasaA) es un polipéptido monocatenario que contiene 4 enlaces disulfuro con un peso molecular de aproximadamente 13,7 kDa.La ARNasa A es una endoribonucleasa que degrada específicamente el ARN monocatenario en los residuos C y U.En concreto, la escisión reconoce el enlace fosfodiéster formado por la 5′-ribosa de un nucleótido y el grupo fosfato en la 3′-ribosa del nucleótido de pirimidina adyacente, de modo que los 2,3′-fosfatos cíclicos se hidrolizan a los correspondientes 3 ′nucleósidos fosfatos (por ejemplo, pG-pG-pC-pA-pG es escindido por la RNasa A para generar pG-pG-pCp y A-PG).La ARNasa A es la más activa en la escisión del ARN monocatenario.La concentración de trabajo recomendada es de 1-100 μG/mL, compatible con varios sistemas de reacción.Se puede utilizar una concentración baja de sal (NaCl 0-100 mM) para cortar ARN monocatenario, ARN bicatenario y cadenas de ARN formadas por hibridación ARN-ADN.Sin embargo, a una alta concentración de sal (≥0,3 M), la RNasa A solo escinde específicamente el ARN monocatenario.
La RNasa A se usa más comúnmente para eliminar el ARN durante la preparación de ADN plasmídico o ADN genómico. El hecho de que la DNasa esté activa o no durante el proceso de preparación puede afectar fácilmente la reacción.Se puede utilizar el método tradicional de hervir en un baño de agua para inactivar la actividad de la ADNasa.Este producto no contiene DNasa ni proteasa y no requiere tratamiento térmico antes de su uso.Además, este producto también se puede utilizar en experimentos de biología molecular, como el análisis de protección de ARNasa y el análisis de secuencia de ARN.
Condiciones de almacenaje
El producto se puede almacenar a -25 ~ -15 ℃, válido por 2 años.
Instrucciones
Este es uno de los métodos comunes para preparar una solución de almacenamiento de RNasa A.También se puede preparar porotros métodos según los métodos tradicionales del laboratorio o de la literatura de referencia (comodisolver directamente en solución de Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 o Tris-NaCl)
1. Utilice acetato de sodio 10 mM (pH 5,2) para preparar 10 mg/ml de solución de almacenamiento de ARNasa A.
2. Calentar a 100 ℃ durante 15 min.
3. Enfríe a temperatura ambiente, agregue 1/10 del volumen de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), ajuste su pH a 7,4 (paraPor ejemplo, agregue 500 ml de solución de almacenamiento de RNasa de 10 g/ml 1 M Tris-HCL, PH7.4)
4. Subenvasado a -20 ℃ para almacenamiento congelado, que puede permanecer estable hasta por 2 años.
[Notas]: Al hervir la solución de RNasaA en condiciones neutras, se formará precipitación de RNasa;Hervir a un pH más bajo, y si hay precipitación se puede observar, lo que puede deberse a la presencia de impurezas proteicas.Si se encuentran sedimentos después de hervir, las impurezas se pueden eliminar mediante centrifugación de alta velocidad (13000 rpm) y luego subenvasarlas para almacenarlas en congelación.
Información del Producto
| Sinónimos | Ribonucleasa I;Ribonucleasa pancreática;Ribonucleasa 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolasa;ARNasa A;Endoribonulcease I |
| No CAS. | 9001-99-4 |
| Apariencia | Polvo liofilizado blanco |
| Peso molecular | ~ 13,7 kDa (secuencia de aminoácidos) |
| Valor de Ph | 7,6 (rango de actividad 6-10) |
| Temperatura adecuada | 60 ℃ (rango de actividad 15-70 ℃) |
| Agente activador | Na2+.k+ |
| inhibidor | Inhibidor de la ARNasa |
| Método de inactivación | No se puede inactivar mediante calentamiento; se sugiere utilizar una columna centrífuga. |
| Origen | Bovino |
| Solubilidad | Soluble en agua (10 mg/ml) |
| Pérdida en seco | ≤5,0% |
| actividad enzimática | ≥60 unidades Kunitz/mg |
| Punto isoeléctrico | 9.6 |
Notas
Para su seguridad y salud, use batas de laboratorio y guantes desechables para la operación.
