Mezcla maestra colorimétrica RT-LAMP HCB5204A
Este producto contiene tampón de reacción, mezcla de enzimas RT (ADN polimerasa Bst y transcriptasa inversa resistente al calor), protectores liofilizados y componentes de colorantes cromogénicos.Para usarlo, simplemente use Buffer, la enzima de reacción y el cebador se mezclan y se agregan a la plantilla;añadir protector liofilizado puede ser sencillo.Se conectó a un liofilizador y se liofilizó, y cuando se usó solo se agregaron los cebadores y las plantillas.Este kit proporciona una detección visual clara y rápida de la amplificación, cuya reacción negativa se indica en rojo y la reacción positiva se indica mediante un cambio a amarillo.
Componente
| Componente | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Tampón de amplificación mediado por bucle (con tinte) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| Mezcla de RT-Enzimas | 270 µL | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Protector liofilizado | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Aplicaciones
Para amplificación isotérmica de ADN o ARN.
Condiciones de almacenaje
Transportado con hielo seco, almacenado a -25 ~ -15 ℃.Evitar heladas y descongelaciones frecuentes, el producto tiene una validez de 12 meses.
Protocolo
1.Descongelar el tampón de reacción que se va a utilizar a temperatura ambiente.Agite brevemente o invierta los tubos varias veces para mezclar bien, luego centrifugue para recoger el líquido en el fondo del tubo.
2.Preparación del sistema de reacción.Este reactivo se puede preparar en dos sistemas de reacción, mezcla de reacción líquida y mezcla de sistema liofilizado.
1) Prepare la mezcla de reacción líquida
| Componente | Volumen |
| Tampón de amplificación mediado por bucle (con tinte) | 10 µl |
| Mezcla de RT-Enzimas | 2,8 µL |
| 10 × mezcla de imprimacióna | 5 µl |
| Plantillas ADN/ARN b | × µL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 µL |
2) Mezcla del sistema de liofilización
① Preparar mezcla liofilizada
| Componente | Volumen |
| Tampón de amplificación mediado por bucle (con tinte) | 10 µl |
| Protector liofilizado | 20 µl |
| Mezcla de RT-Enzimas | 2,8 µL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 µL |
② Liofilización: la mezcla preparada se liofilizó en un sistema de 50 μl.
③ Prepare la mezcla de reacción
| Componente | Volumen |
| Mezcla liofilizada | 1 pieza |
| 10 × mezcla de imprimacióna | 5 µl |
| Plantillas ADN/ARN b | × µL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 µL |
Notas:
1) a.Mezcla de cebadores 10x: FIP/BIP 16 µM, F3/B3 2 µM, bucle F/B 4 µM;
2) b.Se recomienda DEPC (soluble en agua) para la plantilla de ácido nucleico.
1.Incubar a 65°C durante 30-45 minutos, que se puede extender adecuadamente según el cambio de color. Tiempo de reacción.
2.A simple vista, el amarillo era positivo y el rojo negativo.
Notas
1.Puede aparecer sal en el fondo del tubo de solución amortiguadora; agite brevemente o invierta los tubos varias veces para mezclar bien a temperatura ambiente.
2.La temperatura de reacción se puede optimizar entre 62 ℃ y 68 ℃ según el estado de los cebadores.
3.Los reactivos envasados no deben exponerse al aire durante mucho tiempo.
4.La reacción de decoloración roja y amarilla depende del cambio de pH del sistema de reacción; no utilice la solución de almacenamiento de ácido nucleico Tris que contiene, se recomienda usar ddH2O ácido nucleico almacenado;
5.El experimento debe estar estandarizado, incluida la preparación del sistema de reacción, la liofilización y el procesamiento de muestras y el proceso de adición de muestras;
6.Para evitar la contaminación, se recomienda preparar el sistema de reacción en un banco ultralimpio, en otro agregar plantillas a la campana extractora de la sala para evitar interferencias de falsos positivos.
