Reactivo de liberación de muestra
El reactivo de liberación de muestras es para escenarios de diagnóstico POCT molecular.Para los dos sistemas de amplificación directa LAMP y amplificación directa PCR, no hay necesidad de extracción de ácido nucleico.El lisado bruto de la muestra se puede amplificar directamente, el gen objetivo se puede detectar con precisión y el tiempo de detección de la muestra se puede acortar aún más, lo que se adapta perfectamente a los requisitos de aplicación de la POCT molecular.Es adecuado para hisopos nasales, hisopos de garganta y otros tipos de muestras.Las muestras procesadas se pueden utilizar directamente para la detección LAMP o PCR cuantitativa por fluorescencia en tiempo real, y se pueden lograr los mismos resultados que los métodos de extracción convencionales sin complicadas operaciones de extracción de ácidos nucleicos.
Condiciones de almacenaje
Transporte y almacene a temperatura ambiente.
Control de calidad
Detección funcional: qPCR cuantitativa: se amplificó el sistema de reactivo de liberación de muestras de 800 μl
con 1000 copias de Novel Pseudovirus, una muestra de hisopo nasal, lo que resultó en curvas de amplificación similares yValores de ΔCt dentro de ± 0,5 Ct.
Procedimiento experimentalres
1. Tome 800 μl de reactivo de liberación de muestra y distribuya la solución de lisis en un tubo de muestreo de 1,5 ml.
2. Tome el hisopo nasal o el hisopo de garganta con el hisopo; Procedimiento de muestreo del hisopo nasal: tome el hisopo estéril y colóquelo en las fosas nasales, avance lentamente hasta aproximadamente 1,5 cm de profundidad, gire suavemente 4 veces contra la mucosa nasal durante más de 15 segundos , luego repita la misma operación en la otra cavidad nasal con el mismo hisopo. Procedimiento de muestreo del hisopo de garganta: tome el hisopo estéril y limpie suave y rápidamente las amígdalas faríngeas y la pared faríngea trasera 3 veces.
3.Coloque el hisopo inmediatamente en el tubo de muestra.El cabezal del hisopo se debe girar y mezclar en la solución de almacenamiento durante al menos 30 segundos para garantizar que la muestra se eluya completamente en el tubo de muestreo.
4. Incubación a temperatura ambiente (20 ~ 25 ℃) durante 1 min, se completa la preparación del tampón de lisis.
5. Tanto el sistema RT-PCR como el RT-LAMP de 25 μl fueron compatibles con una cantidad de 10 μl de adición de plantilla para experimentos de detección.
Notas
1. La cantidad mínima de lisado directo de muestra correspondiente a un solo hisopo se puede ajustar a 400 μl, que se puede ajustar según las necesidades de la prueba.
2. Una vez que la muestra sea procesada por el reactivo de liberación de muestra, se recomienda realizar la siguiente fase de la prueba lo antes posible; el intervalo de tiempo de espera es preferiblemente inferior a 1 hora.
3. El pH del lisado de la muestra es ácido y el sistema de detección necesita tener un tampón determinado.Es adecuado para la mayoría de las detecciones de fluorescencia PCR, RT-PCR y LAMP con tampón de pH, pero no es adecuado para la detección colorimétrica LAMP sin tampón.
