Ultranucleasa grado GMP
Número de gato: HC2016A
UltraNuclease de grado GMP se expresa y purifica en Escherichia coli (E.coli) mediante ingeniería genética y preparación en entornos GMP.Puede reducir la viscosidad del sobrenadante celular y del lisado celular en la investigación científica, aumentar la eficiencia de la purificación de proteínas y mejorar la investigación funcional de las proteínas.El producto también puede reducir los residuos de ácido nucleico del huésped a grado pg, mejorando el rendimiento y la seguridad de los productos biológicos de aplicaciones que incluyen la purificación de virus, la fabricación de vacunas y la fabricación de productos farmacéuticos de proteínas/polisacáridos.Además, el producto también se puede aplicar para prevenir la aglomeración de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) en terapia celular y desarrollo de vacunas.
UltraNuclease se proporciona en forma de reactivo esterilizado, eluido en tampón (Tris-HCL 20 mM, pH 8,0, MgCl 2 mM, NaCl 20 mM, 50 % de glicerina), con la apariencia de un líquido transparente e incoloro.Este producto se produce según los requisitos del proceso GMP y se suministra en forma líquida.
Componentes
Grado UltraNuclease GMP (250 U/μL)
Condiciones de almacenaje
El producto se envía con hielo seco y se puede almacenar a -25 ℃ ~ -15 °C durante dos años.
Si el producto está abierto y ha estado almacenado a 4℃ durante más de una semana, recomendamos filtrarel producto para evitar la contaminación microbiana.
Especificaciones
| Anfitrión de expresión | E. coli recombinante con gen UltraNuclease |
| Peso molecular | 26,5 kDa |
| punto electrico | 6,85 |
| Pureza | ≥99% (SDS-PÁGINA) |
| Búfer de almacenamiento | Tris-HCL 20 mM, pH 8,0, MgCl 2 mM, NaCl 20 mM, 50 % de glicerina |
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Definición de unidad | La definición de una unidad de actividad (U) es la cantidad de enzima utilizada paracambiar el valor de absorción de ΔA260 en 1,0 en 30 minutos en un recipiente de 2,625 mlsistema de reacción a 37 ℃ con un pH de 8,0 (equivalente a la digestión completa de37 μg de ADN de esperma de salmón en oligonucleótidos). |
Instrucciones
1. muestra Recopilación
Células adherentes: retirar el medio, lavar las células con PBS y retirar el sobrenadante.
Células en suspensión: recoger las células por centrifugación, lavar las células con PBS, centrifugar a 6.000rpm durante 10 min, recoger el sedimento.
Escherichia coli: recoger las bacterias por centrifugación, lavar una vez con PBS, centrifugar a 8.000rpm durante 5 min y recoger el sedimento.
2. Tratamiento de muestra
Trate los sedimentos celulares recolectados con tampón de lisis en una proporción de masa (g) a volumen (ml) 1: (10-20), o mediante métodos mecánicos o químicos en hielo o a temperatura ambiente (1 g de sedimento celular contiene aproximadamente
109 celdas).
3. Tratamiento enzimático
Agregue MgCl 1-5 mM al sistema de reacción y ajuste el pH a 8-9.
Agregue UltraNuclease según la proporción de 250 unidades para digerir 1 g de sedimentos celulares, incube a 37 ℃ durante más de 30 minutos.Consulte el formulario "Tiempo de reacción recomendado" para elegir elduración del tratamiento.
4. sobrenadante Recopilación
Centrifugar a 12.000 rpm durante 30 minutos y recoger el sobrenadante.
Nota: Si la solución es ácida o alcalina, o contiene altas concentraciones de sal, detergentes odesnaturalizantes, aumente la dosis de enzima o extienda el tiempo de tratamiento en consecuencia.
Condiciones de reacción recomendadascomplementos
| Parámetro | Condición óptima | Condición efectiva |
| Mg²+Concentración | 1-5 mm | 1-10 mm |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatura | 37 ℃ | 0-42℃ |
| Concentración TDT | 0-100 mm | >0 mm |
| Concentración de mercaptoetanol | 0-100 mm | >0 mm |
| Concentración de cationes monovalentes | 0-20 mm | 0-150 mm |
| Concentración de fosfato lon | 0-10 mm | 0-100 mm |
Recomendado Reacción Tiempo (37 ℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Cantidad de Ultranucleasa (concentración final) | Tiempo de reacción |
| 0,25 U/mL | >10h |
| 2,5 U/mL | >4h |
| 25 U/mL | 30 minutos |
Notas:
Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
