Ultranucleasa
UltraNuclease es una endonucleasa genéticamente modificada derivada de Serratia marcescens, que es capaz de degradar ADN o ARN, ya sea bicatenario o monocatenario, lineal o circular en una amplia gama de condiciones, degradar completamente los ácidos nucleicos en oligonucleótidos 5'-monofosfato con una longitud de 3 a 5 bases. .Después de la modificación de ingeniería genética, el producto se fermentó, expresó y purificó en Escherichia coli (E. coli), lo que reduce la viscosidad del sobrenadante celular y del lisado celular en la investigación científica, pero también mejora la eficiencia de la purificación y la investigación funcional de las proteínas.También se puede utilizar en la terapia génica, la purificación de virus, la producción de vacunas y la industria farmacéutica de proteínas y polisacáridos como reactivo de eliminación de ácidos nucleicos residuales del huésped.
Características del producto
No CAS. | 9025-65-4 |
CE No. | |
Peso molecular | 30kDa |
Punto isoeléctrico | 6,85 |
Pureza de la proteína | ≥99% (SDS-PÁGINA Y SEC-HPLC) |
Actividad específica | ≥1.1×106U/mg |
Temperatura óptima | 37ºC |
pH óptimo | 8.0 |
Actividad de proteasa | negativo |
Carga biológica | <10 UFC/100.000 U |
Proteína residual de la célula huésped | ≤10 ppm |
Metal pesado | ≤10 ppm |
Endotoxina bacteriana | <0,25 UE/1000 U |
Búfer de almacenamiento | Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM, 20 mM NaCl, 50% glicerol |
Condiciones de almacenaje
Transporte ≤0°C; -25~-15°C Almacenamiento, 2 años de validez (evite la congelación y descongelación).
Definición de unidad
La cantidad de enzima utilizada para cambiar el valor de absorción de △A260 en 1,0 en 30 minutos a 37 °C, pH 8,0, equivalente a 37 μg de ADN de esperma de salmón digerido mediante corte en oligonucleótidos, se definió como una unidad activa (U).
Control de calidad
Proteína residual de la célula huésped: kit ELISA
•proteasa Residuos: 250 KU/mL de UltraNuclease reaccionaron con el sustrato durante 60 minutos, no se detectó actividad.
•Endotoxina bacteriana: Prueba LAL, método de prueba de límite de gel de la Farmacopea de la República Popular China Volumen 4 (edición 2020).Reglas Generales (1143).
•Carga biológica: Farmacopea de la República Popular China Volumen 4 (Edición 2020): General
Reglas para la prueba de esterilidad (1101), Estándar nacional de la República Popular China, GB 4789.2-2016.
•Metal pesado:ICP-AES, HJ776-2015.
Operación
La actividad UltraNuclease se inhibió significativamente cuando la concentración de SDS era superior al 0,1 % o EDTA.
La concentración fue superior a 1 mM. Los surfactantes Triton X-100, Tween 20 y Tween 80 no tuvieron ningún efecto sobre la nucleasa.
propiedades cuando la concentración era inferior al 1,5%.
Operación | Operación óptima | Operación válida |
Temperatura | 37 ℃ | 0-45℃ |
pH | 8.0-9.2 | 6,0-11,0 |
Mg2+ | 1-2 mm | 1-15 mm |
TDT | 0-100 mm | >100 mm |
2-mercaptoetanol | 0-100 mm | >100 mm |
Ion metálico monovalente (Na+, K+, etc.) | 0-20 mm | 0-200 mm |
PO43- | 0-10 mm | 0-100 mm |
Uso y dosificación
• Eliminar el ácido nucleico exógeno de los productos vacunales, reducir el riesgo de toxicidad residual del ácido nucleico y mejorar la seguridad del producto.
• Reducir la viscosidad del líquido de alimentación causada por el ácido nucleico, acortar el tiempo de procesamiento y aumentar el rendimiento de proteínas.
• Eliminar el ácido nucleico que envuelve la partícula (virus, cuerpo de inclusión, etc.), lo cual es propicio
a la liberación y purificación de la partícula.
Tipo experimental | Producción de proteínas | virus, vacuna | Drogas celulares |
Número de celdas | 1 g de peso húmedo de células (resuspendido con 10 ml de tampón) | 1L fermentación sobrenadante líquido | 1L de cultivo |
Dosis mínima | 250U | 100U | 100U |
Dósis recomendada | 2500U | 25000U | 5000U |
• El tratamiento con nucleasa puede mejorar la resolución y recuperación de la muestra para cromatografía en columna, electroforesis y análisis de transferencia.
• En la terapia génica, se elimina el ácido nucleico para obtener virus adenoasociados purificados.