Enzimas UDG/UNG
La UDG (uracilo ADN glicosilasa) puede catalizar la hidrólisis del enlace N-glucosídico entre la base de uracilo y la columna vertebral de azúcar-fosfato en el ADN ss y el ADN ds.Puede controlar fácilmente la contaminación por aerosoles y es adecuado para sistemas de biología molecular comunes como PCR, qPCR, RT-qPCR y LAMP.
Especificaciones
| Anfitrión de expresión | E. coli recombinante con gen de uracilo ADN glicosilasa |
| Peso molecular | 24. 8kDa |
| Pureza | ≥95% (SDS-PÁGINA) |
| Inactivación por calor | 95℃, 5~10 minutos |
| Definición de unidad | Una unidad (U) se define como la cantidad de enzima necesaria para catalizar la hidrólisis de 1 μg de ADNbc que contiene dU en 30 minutos a 25 ℃. |
Almacenamiento
El producto debe almacenarse entre -25 ℃ ~ -15 °C durante dos años.
Instrucciones
1.Preparación de la mezcla de reacción de PCR según el siguiente sistema.
| Componentes | Volumen (μL) | Concentración final |
| 10×Tampón de PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10 mmol/lixiviación) | 1 | 0,2 mmol/lixiviación |
| Plantilla de ADN | X | - |
| Cebador1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 µmol/L |
| Imprimador 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 µmol/L |
| Taq ADN polimerasa (5 U/μL) | 0, 5 | 0, 05 U/μL |
| Uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Hasta 50 | - |
Nota: Según los requisitos experimentales, la concentración final de dUTP se puede ajustar entre 0,2 y 0,6 mmol/l, y se pueden añadir selectivamente 0,2 mmol/l de dTTP.
2.Procedimiento de amplificación
| Paso del ciclo | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| degradación de la plantilla que contiene dU | 25 ℃ | 10 minutos | 1 |
| Activación UDG, desnaturalización inicial de plantilla. | 95 ℃ | 5~10 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10 seg |
30-35 |
| Recocido | 60℃ | 20 seg | |
| Extensión | 72 ℃ | 30 segundos/kb | |
| Prórroga definitiva | 72 ℃ | 5 minutos | 1 |
Nota: El tiempo de reacción a 25°C se puede ajustar en 5 a 10 minutos según los requisitos experimentales.
Notas
1.UDG está activo en la mayoría de los tampones de reacción de PCR.
2.Las enzimas deben almacenarse en una nevera o en un baño de hielo cuando se usan, y deben almacenarse a -20 °C inmediatamente después de su uso.
3.Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
