Kit de extracción de ADN/ARN viral
Este kit es adecuado para la extracción rápida de ADN/ARN viral de alta pureza a partir de muestras como hisopos nasofaríngeos, hisopos ambientales, sobrenadantes de cultivos celulares y sobrenadantes de homogenados de tejidos.El kit se basa en una tecnología de purificación de membrana de sílice que elimina la necesidad de utilizar disolventes orgánicos de fenol/cloroformo o la lenta precipitación con alcohol para extraer ADN/ARN viral de alta calidad.Los ácidos nucleicos obtenidos están libres de impurezas y listos para su uso en experimentos posteriores, como transcripción inversa, PCR, RT-PCR, PCR en tiempo real, secuenciación de próxima generación (NGS) y transferencia Northern.
Condiciones de almacenaje
Almacenar a 15 ~ 25 ℃ y transportar a temperatura ambiente.
Componentes
| Componentes | 100RXNS |
| Búfer VL | 50ml |
| Búfer RW | 120ml |
| ddH2 O libre de ARNasa | 6ml |
| Columnas de ARN FastPure | 100 |
| Tubos de recolección (2ml) | 100 |
| Tubos de recolección sin ARNasa (1,5 ml) | 100 |
Búfer VL:Proporcionar un entorno para la lisis y la unión.
Búfer RW:Elimina proteínas residuales y otras impurezas.
ddH2O libre de ARNasa:Eluir ADN/ARN de la membrana en la columna de centrifugación.
Columnas de ARN FastPure:Adsorbe específicamente ADN/ARN.
Tubos de recogida 2 ml:Recoger el filtrado.
Tubos de recogida sin ARNasa de 1,5 ml:Recoge ADN/ARN.
Aplicaciones
Hisopos nasofaríngeos, hisopos ambientales, sobrenadantes de cultivos celulares y sobrenadantes de homogenados de tejidos.
Mater preparado por uno mismoiales
Puntas de pipeta sin RNasa, tubos de centrífuga sin RNasa de 1,5 ml, centrífuga, mezclador vórtex y pipetas.
Proceso de experimento
Realice todos los pasos siguientes en un gabinete de bioseguridad.
1. Agregue 200 μl de la muestra a un tubo de centrífuga sin ARNasa (compense con PBS o NaCl al 0,9% en caso de que la muestra sea insuficiente), agregue 500 μl de Buffer VL, mezcle bien con un vórtex durante 15 a 30 segundos y centrifugue. brevemente para recoger la mezcla en el fondo del tubo.
2. Coloque las columnas de ARN FastPure en tubos de recolección de 2 ml.Transfiera la mezcla del paso 1 a las columnas de ARN FastPure, centrifugue a 12 000 rpm (13 400 × g) durante 1 min y deseche el filtrado.
3. Agregue 600 µl de tampón RW a las columnas de ARN FastPure, centrifugue a 12 000 rpm (13 400 × g) durante 30 segundos y deseche el filtrado.
4. Repita el paso 3.
5. Centrifugar la columna vacía a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 2 min.
6. Transfiera con cuidado las columnas de ARN FastPure a unos nuevos tubos de recogida sin RNasa de 1,5 ml (incluidos en el kit) y agregue de 30 a 50 µl de ddH2O sin RNasa al centro de la membrana sin tocar la columna.Dejar reposar a temperatura ambiente durante 1 min y centrifugar a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 1 min.
7. Deseche las columnas de ARN FastPure.El ADN/ARN se puede utilizar directamente para ensayos posteriores o almacenarse a -30 ~ -15 °C durante un período corto o a -85 ~ -65 °C durante un período más largo.
Notas
Sólo para uso en investigación.No debe utilizarse en los procedimientos de diagnóstico.
1. Equilibre las muestras a temperatura ambiente de antemano.
2. Los virus son muy infecciosos.Asegúrese de tomar todas las precauciones de seguridad necesarias antes del experimento.
3. Evite congelar y descongelar repetidamente la muestra, ya que esto puede provocar una degradación o una reducción del rendimiento del ADN/ARN viral extraído.
4. El equipo preparado por usted mismo incluye puntas de pipeta sin RNasa, tubos para centrífuga sin RNasa de 1,5 ml, centrífuga, mezclador vórtex y pipetas.
5. Cuando utilice el kit, use una bata de laboratorio, guantes de látex desechables y una mascarilla desechable, y utilice consumibles sin RNasa para minimizar el riesgo de contaminación por RNasa.
6. Realice todos los pasos a temperatura ambiente a menos que se especifique lo contrario.
Mecanismo y flujo de trabajo
