Premezcla de sonda RT-qPCR rápida de un paso-UNG
Número de gato: HCR5143A
El kit de sonda One Step RT-qPCR (FOR FAST) es un kit de detección rápida de RT-qPCR basado en sonda adecuado para PCR cuantitativa simple o múltiple utilizando ARN como plantilla (como el virus de ARN).Este producto utiliza una nueva generación de ADN polimerasa Taq modificada con anticuerpos y transcriptasa inversa dedicada de un solo paso, con un tampón optimizado para una amplificación rápida, que tiene una velocidad de amplificación más rápida, una mayor eficiencia de amplificación y especificidad.Admite amplificación equilibrada tanto en singleplex como en multiplex de muestras de baja y alta concentración en poco tiempo.
Componentes
1. 5×tampón RT-qPCR (U+)
2. Mezcla de enzimas (U+)
Notas:
a.5 × tampón RT-qPCR (U+) incluye dNTP y Mg2+;
b.La mezcla de enzimas (U+) incluye transcriptasa inversa, ADN polimerasa Hot Start Taq, inhibidor de RNasa y UDG;
C.Utilice puntas sin ARNasa, tubos EP, etc.
Antes de su uso, mezcle bien el tampón 5×RT-qPCR (U+).Si hay precipitación después de la descongelación, espere a que el tampón vuelva a la temperatura ambiente, mezcle y disuelva, y luego úselo normalmente.
Condiciones de almacenaje
El producto se envía con hielo seco y se puede almacenar a -25~-15 ℃ durante 1 año.
Instrucciones
1. Reacción Sistema
| Componentes | Volumen (20 µL reacción) |
| 2 × tampón RT-qPCR | 4μL |
| Mezcla de enzimas (U+) | 0,8 μl |
| Cartilla hacia adelante | 0,1 ~ 1,0 µM |
| Imprimación inversa | 0,1 ~ 1,0 µM |
| Sonda TaqMan | 0,05~0,25μM |
| Plantilla | X µL |
| Agua libre de ARNasa | hasta 25μL |
Notas: El volumen de reacción es de 10 a 50 μl.
2. Protocolo de ciclismo (Sestándar)
| Ciclo paso | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Transcripción inversa | 55℃ | 10 minutos | 1 |
| Desnaturalización inicial | 95℃ | 30 segundos | 1 |
| Desnaturalización | 95℃ | 10 seg | 45 |
| Recocido/Extensión | 60℃ | 30 segundos |
| Protocolo de ciclismo (Rápido) Ciclo paso |
Temperatura. |
Tiempo |
Ciclos |
| Transcripción inversa | 55℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturalización inicial | 95℃ | 5 segundos | 1 |
| Desnaturalización | 95℃ | 3 segundos | 43 |
| Recocido/Extensión | 60℃ | 10 segundos |
Notas:
a.La temperatura de transcripción inversa está entre 50 ℃ y 60 ℃, aumentar la temperatura ayuda a amplificar estructuras complejas y plantillas con alto contenido de CG;
b.La temperatura de recocido óptima debe ajustarse en función del valor de Tm del cebador y seleccionar el tiempo más corto para la recolección de la señal de fluorescencia según el instrumento de PCR en tiempo real.
Notas
Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
