2×PCR Master Mix (sin tinte)
PCR Master Mix es un tipo de solución premezclada de PCR convencional lista para usar, que incluye Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 y tampón optimizado.Durante la reacción, solo se pueden agregar el cebador y la plantilla para la amplificación, lo que simplifica enormemente los pasos operativos del experimento.Este producto contiene excelentes estabilizadores y puede almacenarse durante 3 meses a 4 ℃.El producto de la PCR tiene una protuberancia 3′-dA y se puede clonar fácilmente en el vector T.
Condiciones de almacenaje
El producto debe almacenarse a -25 ℃ ~ -15 ℃ durante dos años.
Especificaciones
| Fidelidad (frente a Taq) | 1× |
| Arranque en caliente | No |
| Sobresalir | 3′-A |
| polimerasa | ADN polimerasa Taq |
| Formato de reacción | SuperMix o Mezcla Maestra |
| Velocidad de reacción | Estándar |
| tipo de producto | Mezcla maestra de PCR (2×) |
Instrucciones
1.Sistema de reacción
| Componentes | Tamaño (μL) |
| Plantilla de ADN | Adecuado |
| Cebador 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Cebador 2 (10 μmol/L) | 2 |
| Mezcla maestra de PCR | 25 |
| ddH2O | hasta 50 |
2.Protocolo de amplificación
| Pasos del ciclo | Temperatura (°C) | Tiempo | Ciclos |
| Predesnaturalización | 94℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 94℃ | 30 segundos | 35 |
| Recocido | 50-60 ℃ | 30 segundos | |
| Extensión | 72℃ | 30-60 segundos/kb | |
| Ampliación definitiva | 72℃ | 10 minutos | 1 |
Notas:
1) Uso de plantilla: 50-200 ng de ADN genómico;0,1-10 ng de ADN plasmídico.
2) magnesio2+Concentración: Este producto contiene 3 mM de MgCl2 adecuado para la mayoría de las reacciones de PCR.
3) Temperatura de recocido: consulte el valor teórico de Tm de los cebadores.La temperatura de recocido se puede establecer entre 2 y 5 ℃ por debajo del valor teórico de la imprimación.
4) Tiempo de extensión: Para identificación molecular se recomienda 30 seg/kb.Para la clonación de genes, 60Se recomienda seg/kb.
Notas
1.Para su seguridad y salud, use batas de laboratorio y guantes desechables para la operación.
2.¡Solo para uso en investigación!
