BspQI
BspQI se puede expresar de forma recombinante en E. coli que puede reconocer sitios específicos y se produce bajo
BspQI, una endonucleasa de restricción IIs, se deriva de una cepa de E. coli recombinante que porta el gen BspQI clonado y modificado de Bacillus sphaericus.Puede reconocer sitios específicos, y la secuencia de reconocimiento y los sitios de escisión son los siguientes:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Características del producto
1. Alta actividad, digestión rápida;
2. Baja actividad de las estrellas, lo que garantiza un corte preciso como el de un “bisturí”;
3. Sin BSA y libre de origen animal;
Sensibilidad a la metilación
Dsoy metilación:No sensible;
Dcmmetilación:No sensible;
Metilación de CpG:No sensible;
Condiciones de almacenaje
El producto debe enviarse ≤ 0 ℃;Almacenar en condiciones de -25 ~ - 15 ℃.
Búfer de almacenamiento
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, ditiotreitol 1,0 mM, albúmina recombinante 500 µg/ml, Trition X-100 al 0,1 % y glicerol al 50 % (pH 7,0 a 25 °C).
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN de control interno en 1 hora a 50 °C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Control de calidad
Ensayo de pureza de proteínas (SDS-PAGE):La pureza de BspQI fue ≥95% determinada mediante análisis SDS-PAGE.
ARNasa:10 U de BspQI con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 50 ℃ no producen degradación, según lo determinado mediante electroforesis en gel de agarosa.
Actividad de ADNasa no específica:10 U de BspQI con 1 μg de ADN λ a 50 ℃ durante 16 horas, en comparación con 50 ℃ durante 1 hora, no producen exceso de ADN según lo determinado mediante electroforesis en gel de agarosa.
Ligadura y Recorte:Después de la digestión de 1 μg de λDNA con 10 U de BspQI, los fragmentos de ADN se pueden ligar con ADN ligasa T4 a 16ºC.Y estos fragmentos ligados se pueden volver a cortar con BspQI.
E. coli ADN: La detección de qPCR TaqMan específica de ADNr 16s de E. coli mostró que el residuo del genoma de E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Residuos de proteínas del huésped:≤ 50 ppm
Bacteriano Endotoxina: Prueba LAL, según la Farmacopea China IV edición 2020, método de prueba de límite de gel, regla general (1143).El contenido de endotoxinas bacterianas debe ser ≤10 UE/mg.
Sistema de reacción y condiciones.
| Componente | Volumen |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 µL |
| ADN | 1 µg |
| 10 tampones BspQ I | 5 µl |
| dd H2O | Hasta 50 µL |
Condiciones de reacción: 50 ℃, 1~ 16 h.
Inactivación por calor: 80°C durante 20 min.
El sistema de reacción y las condiciones recomendados pueden proporcionar un efecto de digestión enzimática relativamente bueno, que es solo como referencia; consulte los resultados experimentales para obtener más detalles.
Aplicación del producto
Digestión con endonucleasas de restricción, Clonación rápida.
Notas
1. El volumen de enzima ≤ 1/10 del volumen de reacción.
2. La actividad de las estrellas puede ocurrir cuando la concentración de glicerol es superior al 5%.
3. Puede ocurrir actividad de escisión cuando el sustrato está por debajo de la proporción recomendada.
