Kit de genotipado de ratón

Número de gato: HCR2021A

Este producto es un kit diseñado para la identificación rápida de genotipos de ratón, incluida la extracción de ADN crudo y el sistema de amplificación por PCR.El producto se puede utilizar para la amplificación por PCR directamente de la cola, la oreja, los dedos de los pies y otros tejidos del ratón después de una simple escisión mediante Lysis Buffer y Proteinase k.Sin digestión nocturna, extracción con fenol-cloroformo ni purificación en columna, lo cual es simple y acorta el tiempo que consumen los experimentos.El producto es adecuado para la amplificación de fragmentos diana de hasta 2 kb y reacciones de PCR múltiples con hasta 3 pares de cebadores.La mezcla de PCR directa de tejido de ratón 2× contiene ADN polimerasa genéticamente modificada, Mg²⁺, dNTP y un sistema tampón optimizado para proporcionar una alta eficiencia de amplificación y tolerancia a inhibidores, de modo que las reacciones de PCR se puedan llevar a cabo agregando plantilla y cebadores y rehidratando el producto a 1x.El producto de PCR amplificado con este producto tiene una base "A" prominente en el extremo 3' y puede usarse directamente para la clonación de TA después de la purificación.

Componentes

Condiciones de almacenaje

Los productos deben almacenarse a -25~-15℃ durante 2 años.Después de descongelarlo, Lysis Buffer se puede almacenar a 2 ~ 8 ℃ para uso múltiple a corto plazo y mezclar bien cuando se usa.

Solicitud

Este producto es adecuado para análisis de knockout en ratones, detección de transgénicos, genotipado, etc.

Características

1.Operación simple: no es necesario extraer ADN genómico;

2.Amplia aplicación: adecuada para la amplificación directa de varios tejidos de ratón.

Instrucciones

1.Liberación de ADN genómico.

1) Preparación del lisado

El lisado de tejido se prepara de acuerdo con la cantidad de muestras de ratón que se van a lisar (el lisado de tejido debe prepararse en el sitio de acuerdo con la dosis y mezclarse bien para su uso) y la proporción de reactivos necesarios para una sola muestra es la siguiente:

2) Preparación de muestras y lisis

Uso recomendado del tejido

Tome una cantidad adecuada de muestras de tejido de ratón en tubos de centrífuga limpios, agregue 200 μl de lisado de tejido fresco a cada tubo de centrífuga, agite y agite, luego incube a 55 ℃ durante 30 minutos y luego caliente a 98 ℃ durante 3 minutos.

3) Centrifugación

Agite bien el lisado y centrifugue a 12.000 rpm durante 5 minutos.El sobrenadante se puede utilizar como plantilla para la amplificación por PCR.Si se necesita la plantilla para su almacenamiento, transfiera el sobrenadante a otro tubo de centrífuga estéril y guárdelo a -20 ℃ durante 2 semanas.

2.Amplificación por PCR

Retire la mezcla de PCR directa de tejido de ratón 2× de -20 ℃ y descongélela en hielo, mezcle boca abajo y prepare el sistema de reacción de PCR de acuerdo con la siguiente tabla (opere en hielo):

Nota:

a) La cantidad agregada no debe exceder 1/10 del sistema y, si se agrega demasiado, se puede inhibir la amplificación por PCR.

Condiciones de PCR recomendadas

Nota:

a) Temperatura de recocido: con referencia al valor de Tm de la imprimación, se recomienda establecer la temperatura de recocido al valor de Tm más pequeño de la imprimación +3~5 ℃.

Problemas comunes y soluciones

1.Sin tiras dirigidas

1) Producto de lisis excesivo.Elija la cantidad más adecuada de plantilla, normalmente no más de 1/10 del sistema;

2) Tamaño de muestra demasiado grande.Diluir el lisado 10 veces y luego amplificar o reducir el tamaño de la muestra y volver a analizar;

3) Las muestras de tejido no son frescas.Se recomienda utilizar muestras de tejido fresco;

4) Mala calidad de la imprimación.Utilice ADN genómico para la amplificación para verificar la calidad del cebador y optimizar el diseño del cebador.

2.Amplificación no específica

1) La temperatura de recocido es demasiado baja y el número de ciclos es demasiado alto.Aumente la temperatura de recocido y reduzca el número de ciclos;

2) La concentración de la plantilla es demasiado alta.Reduzca la cantidad de plantilla o diluya la plantilla 10 veces después de la amplificación;

3) Poca especificidad del cebador.Optimice el diseño del cebador.

Notas

1.Para evitar la contaminación cruzada entre muestras, se deben preparar múltiples herramientas de muestreo y la superficie de las herramientas se puede limpiar con una solución de hipoclorito de sodio al 2% o un limpiador de ácido nucleico después de cada muestreo si se requiere un uso repetido.

2.Se recomienda utilizar tejidos de ratón frescos y el volumen de muestreo no debe ser demasiado grande para evitar afectar los resultados de la amplificación.

3.Lysis Buffer debe evitar la congelación y descongelación frecuente y puede almacenarse entre 2 y 8 ℃ para uso múltiple a corto plazo.Si se almacena a baja temperatura, puede producirse precipitación y debe disolverse por completo antes de su uso.

4.PCR Mix debe evitar la congelación y descongelación frecuente y puede almacenarse a 4 ℃ para un uso repetido a corto plazo.

5.Este producto es sólo para investigación científica experimental y no debe usarse en diagnóstico o tratamiento clínico.