Premezcla de sonda qPCR multiplex
Número de gato: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (colorante basado) es una presolución para amplificación por PCR cuantitativa en tiempo real 2 × caracterizada por una alta sensibilidad y especificidad, que es de color azul y tiene el efecto de adición de muestra.Este producto es un reactivo premezclado 2X Mix que permite hasta cuatro reacciones de PCR cuantitativas fluorescentes en un solo pocillo de reacción.Este producto contiene el método de anticuerpos genéticamente modificados para iniciar en caliente la enzima Taq, lo que mejora en gran medida la sensibilidad y especificidad de la amplificación.Al mismo tiempo, este producto ha optimizado profundamente el tampón de reacciones múltiples, lo que puede mejorar la eficiencia de amplificación de la reacción y promover la amplificación efectiva de plantillas de baja concentración.Este producto se puede utilizar para genotipado y análisis cuantitativo multiplex.
Especificación
| Arranque en caliente | Arranque en caliente incorporado |
| Método de detección | Detección de sonda cebadora |
| método de PCR | qPCR |
| polimerasa | Taq ADN polimerasa |
| tipo de muestra | ADN |
Condiciones de almacenaje
El producto se envía con hielo seco y se puede almacenar a -25~-15 ℃ durante 2 años.
Instrucciones
1. ReacciónSistema
| Componentes | Volumen (μL) | Concentración final |
| 2× mezcla maestra de qPCR multiplex TaqMan | 12.5 | 1× |
| Mezcla de imprimación (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 µmol/L |
| Mezcla de sonda (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Tinte de referencia Rox | 0,5 | 1× |
| Plantilla de ADN/ADNc | 1-10 | - |
| ddH2O | hasta 25 | - |
Notas:Mezcle bien antes de usar para evitar burbujas excesivas al agitar vigorosamente.
a.Concentración de cebador: Primer Mix contiene múltiples pares de cebadores, generalmente cada cebador en una concentración final de 0,2 μmol/L y también se puede ajustar entre 0,1 y 0,5 μmol/L según corresponda.
b.Concentración de la sonda: Probe Mix contiene varias sondas con diferentes señales de fluorescencia y la concentración de cada sonda se puede ajustar entre 50 y 250 nmol/L según la situación específica.
1.Referencia de tinte Rox: se utiliza en instrumentos de amplificación de PCR en tiempo real como Applied Biosystems para corregir el error de la señal de fluorescencia generada entre los pocillos;este producto no contiene referencia de tinte Rox.Se recomienda Cas#10200 si es necesario.
2.Dilución de la plantilla: qPCR es muy sensible y se recomienda diluir la plantilla para su uso.Si la plantilla es una solución madre de ADNc, el volumen de la plantilla no debe exceder 1/10 del volumen total.
3.Sistema de reacción: se recomiendan 25 μl, 30 μl o 50 μl para garantizar la eficacia y repetibilidad de la amplificación del gen objetivo.
4.Preparación del sistema: prepárelo en la mesa súper limpia y utilice las puntas y los tubos de reacción sin residuos de nucleasa;Se recomienda utilizar las puntas con cartuchos filtrantes.Evite la contaminación cruzada y la contaminación por aerosoles.
2.Programa de reacción
| Paso del ciclo | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Desnaturalización inicial | 95℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95℃ | 15 segundos | 45 |
| Recocido/Extensión | 60℃ | 30 segundos |
Notas:
1.Recocido/Extensión: La temperatura y el tiempo se pueden ajustar adecuadamente de acuerdo con el valor Tm del cebador diseñado.
2.Adquisición de señal de fluorescencia: el tiempo de adquisición de señal de fluorescencia requerido para diferentes instrumentos de detección de qPCR es diferente; configúrelo de acuerdo con el límite de tiempo mínimo.El tiempo de varios instrumentos comunes se establece de la siguiente manera:
20 segundos: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 seg: Biosistemas Aplicados 7300
32 seg: Biosistemas Aplicados 7500
Notas
Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
