Premezcla RT-qPCR multiplex de un paso-UNG
Número de gato: HCB5145A
El kit de sonda Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus) es un kit de PCR cuantitativa multiplex basado en ARN como plantilla.Durante el experimento, se realizaron transcripción inversa y PCR cuantitativa en el mismo tubo, lo que simplificó la operación experimental y redujo el riesgo de contaminación.En este kit, el ADNc de la primera cadena se sintetizó eficientemente mediante transcriptasa inversa resistente al calor y se amplificó cuantitativamente mediante la ADN polimerasa HotStart Tag.El kit contiene principalmente tampón MP optimizado, mezcla de enzimas, etc. La solución tampón ya contiene Mg2+y dNTP.Además, se agregan los factores que pueden inhibir eficazmente la amplificación por PCR no específica y mejorar la eficiencia de amplificación de múltiples reacciones de qPCR, lo que puede garantizar la eficiencia de la amplificación y llevar a cabo hasta múltiples reacciones de amplificación.Se agregó el sistema dUTP/UDG para prevenir eficazmente el riesgo de contaminación por aerosoles.
Componentes
1. Amortiguador
2. Mezcla de enzimas
Especificación
| Arranque en caliente | Arranque en caliente incorporado |
| Método de detección | Detección de sonda cebadora |
| método de PCR | RT-qPCR de un paso |
| polimerasa | Taq ADN polimerasa |
| tipo de muestra | ADN |
Condiciones de almacenaje
El producto se envía con hielo seco y se puede almacenar a -25~-15 ℃ durante 1 año.Se debe evitar frecuentescongelar-descongelar.Se recomienda guardar por separado.
Instrucciones
1.Reacción Sistema
| Componentes | Volumen (μL) | Concentración final |
| 2 × búfer MP | 12.5 | 1× |
| Mezcla de enzimas | 1 | - |
| Mezcla de cebador/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Plantilla de ARN | 1-10 | - |
| H2O libre de ARNasa | a 25 | - |
Notas:
Asegúrese de mezclar bien antes de usar, evite el exceso de burbujas causadas por vibraciones violentas.
a.Concentración de cebador: mezcla de cebador que incluye un cebador multiplex; dependiendo de la situación, la concentración óptima del cebador puede estar entre 0,1 y 1,0 μM.
b.Concentración de la sonda: mezcla de sonda que incluye grupo fluorescente de diferencia de etiquetado de sonda multiplex; dependiendo de la situación, la concentración óptima de la sonda puede estar entre 0,05 y 0,5 μM.
C.Dilución de la plantilla: qPCR es muy sensible y se recomienda diluir la plantilla.El valor Ct de control es adecuado entre 20 y 35.
d.Preparación del sistema: prepárelo en la mesa de trabajo ultra limpia, y en la pipeta y el tubo de reacción sin residuos de nucleasa;Se recomienda utilizar el cabezal de la pistola con elemento filtrante.Evite la contaminación cruzada y la contaminación por aerosoles.
2. Ciclismo optimizadoProtocolo
| Ciclo paso | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Transcripción inversa | 50 ℃a | 20 minutos | 1 |
| Desnaturalización inicial | 95 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Reacción de amplificación | 95 ℃ | 15 segundos |
40-45 |
| 60℃ b | 30 segundos c |
Notas:
a.Transcripción inversa: La temperatura puede seleccionar 42°C o 50°C.
b.Reacción de amplificación: La temperatura se ajusta según el valor de Tm de los cebadores diseñados.
C.Adquisición de señal de fluorescencia: configure el procedimiento experimental de acuerdo con los requisitos del manual del instrumento.
Notas
Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
