Inhibidor de la ARNasa (sin glicerol)
El inhibidor de la RNasa murina es un inhibidor de la RNasa murina recombinante expresado y purificado a partir de E. coli.Se une a la ARNasa A, B o C en una proporción de 1:1 mediante enlaces no covalentes, inhibiendo así la actividad de las tres enzimas y protegiendo el ARN de la degradación.Sin embargo, no es eficaz contra RNasa 1, RNasa T1, S1 Nucleasa, RNasa H o RNasa de Aspergillus.El inhibidor de la RNasa murina se probó mediante RT-PCR, RT-qPCR y ARNm de IVT, y fue compatible con varias transcriptasas inversas, ADN polimerasas y ARN polimerasas comerciales.
En comparación con los inhibidores de la RNasa humana, el inhibidor de la RNasa murina no contiene dos cisteínas que son altamente sensibles a la oxidación, lo que provoca la inactivación del inhibidor.Eso lo hace estable a bajas concentraciones de TDT (menos de 1 mM).Esta característica lo hace adecuado para su uso en reacciones donde altas concentraciones de DTT son adversas para la reacción (por ejemplo, RT-PCR en tiempo real).
Aaplicación
Este producto puede usarse ampliamente en cualquier experimento donde sea posible la interferencia de la RNasa para evitar la degradación del ARN, como por ejemplo:
1.Síntesis de ADNc de primera cadena, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2.Proteger el ARN de la degradación en la transcripción/traducción in vitro (por ejemplo, replicación viral in vitro);
3.Inhibición de la actividad RNasa durante el aislamiento y purificación del ARN.
Condiciones de almacenaje
Almacenar a -25 ~ -15 ℃;
Ciclos de congelación-descongelación ≤ 5 veces;
Válido por 1 año.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de inhibidor de RNasa necesaria para inhibir la actividad de 5 ng de RNasa A en un 50%.
Peso molecular
El inhibidor de ARNasa (sin glicerol) es una proteína de 50 kDa.
Control de calidad
exonucleasa Actividad:
La incubación de 40 U de enzima con 1 µg de ADN digerido con λ-Hind III durante 16 horas a 37°C no produjo degradación detectable del ADN según lo determinado mediante electroforesis en gel.
Actividad de endonucleasa:
La incubación de 40 U de enzima con 1 μg de λ de ADN durante 16 horas a 37°C no produjo ninguna degradación detectable del ADN según lo determinado mediante electroforesis en gel.
mellando Actividad:
La incubación de 40 U de enzima con 1 μg de pBR322 durante 16 horas a 37 ℃ no produjo degradación detectable del ADN según lo determinado mediante electroforesis en gel.
ARNasa Actividad:
La incubación de 40 U de enzima con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ no produjo ninguna degradación detectable del ARN según lo determinado mediante electroforesis en gel.
E.ADN de coli:
TaqMan qPCR detecta 40 U de enzima.El ADN de E. coli es ≤ 0, 1 pg/40U.
Nbeneficios según objetivoss
1. No agite ni revuelva violentamente para evitar la inactivación de la enzima.
2.El inhibidor de RNasa está activo a temperaturas que oscilan entre 25 ℃ y 55 ℃ y se inactiva a ≥65 ℃.
3.La actividad de RNasa H, RNasa 1 y RNasa T1 no se inhibe.
4.El rango de pH para inhibir la actividad de la RNasa es amplio (activo a pH 5-9) y exhibe una actividad máxima a pH 7-8.