UNG sensible a la temperatura
UNG sensible a la temperatura (TS-UNG) se obtiene mediante expresión recombinante en E. coli.La enzima cataliza la liberación de uracilo libre a partir del ADN monocatenario y bicatenario que contiene uracilo y es inactiva frente al ARN.En comparación con la enzima UNG convencional de origen genético de E. coli, la enzima TS-UNG tiene mayor actividad a bajas temperaturas (20 ℃ ~ 37 ℃) y es sensible a la temperatura y se inactiva fácilmente (50 ℃), evitando la degradación de la amplificación que contiene dUTP. productos a temperatura ambiente por la actividad residual que puede quedar tras la inactivación de la enzima UNG convencional.Por lo tanto, la enzima TS-UNG no solo es adecuada para la reacción de prevención de contaminación por PCR, sino que también combina bien con el programa de amplificación de RT-PCR y puede usarse en la reacción de prevención de contaminación por RT-PCR.
Aplicación recomendada
Amplificación de la prevención de la contaminación
Condición de almacenamiento
-20°C para almacenamiento a largo plazo, se debe mezclar bien antes de su uso, evitar la congelación y descongelación frecuente.
Búfer de almacenamiento
Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, estabilizador, glicerol al 50 %.
Definición de unidad
La cantidad de enzima necesaria para degradar 1 µg de ADN monocatenario que contiene bases dU en 1 hora a 37°C es 1 unidad de actividad (U).
Control de calidad
1.Pureza electroforética SDS-PAGE superior al 98%
2.Actividad de degradación, control de lote a lote, estabilidad.
3.Sin actividad de nucleasa exógena, sin endonucleasa exógena o contaminación por exonucleasa.
Instrucciones
| Componentes | Volumen (μL) | Concentración final |
| 10 × tampón de PCR (sin dNTP, Mg²+gratis) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 µM |
| dUTP (reemplazar dTTP) | - | 200-600 µM |
| MgCl 25 mM2 | 2-8 µL | 1-4 mm |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 unidades |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5U (0,1-0,5U) |
| 25 × mezcla de imprimacióna | 2 | 1× |
| Plantilla | - | <1μg/reacción |
| ddH₂O | hasta 50 | - |
Nota: a: Si se utiliza para qPCR/qRT-PCR, la sonda fluorescente debe agregarse al sistema de reacción.Normalmente, una concentración final de cebador de 0,2 µM puede dar buenos resultados;cuando el rendimiento de la reacción es deficiente, la concentración del cebador se puede ajustar en el intervalo de 0,2 a 1 µM.Normalmente, la concentración de la sonda se optimiza en el rango de 0,1 a 0,3 µM.Se pueden realizar experimentos de gradiente de concentración para encontrar la mejor combinación de cebador y sonda.
Notas
1.La temperatura de reacción óptima de la enzima TS-UNG es relativamente baja y se puede optimizar en el rango de 20 ℃ ~ 37 ℃, la dosis de enzima y el tiempo de reacción se pueden optimizar en el rango de 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 minutos;y la enzima se puede inactivar en el proceso de transcripción inversa.
2.Es adecuado para PCR y RT-PCR para evitar la contaminación.
3.Evite las frecuentes heladas y descongelaciones y no lo exponga a grandes fluctuaciones de temperatura.
4.Los diferentes genes que se van a amplificar tienen diferente eficiencia de utilización de dUTP y sensibilidad a la enzima UNG, por lo tanto, si el uso del sistema UNG conduce a una disminución en la sensibilidad de detección, el sistema de reacción debe ajustarse y optimizarse; si necesita soporte técnico, comuníquese con nuestra compañía.
