Premezcla verde SYBR RT-qPCR de un paso
Número de gato: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix es para la cuantificación de fluorescencia basada en el tinte SYBR Green I.Al utilizar cebadores específicos de genes, las reacciones de transcripción inversa y qPCR se completan en un solo tubo, lo que elimina la necesidad de operaciones repetidas de apertura de tapas y pipeteo, lo que mejora en gran medida la eficiencia del ensayo y reduce el riesgo de contaminación.Para muestras de ARN, el kit emplea transcriptasa inversa resistente al calor para una síntesis eficiente de ADNc y ADN polimerasa HotStart Taq para una amplificación cuantitativa.Bajo el sistema de tampón optimizado, la sensibilidad del kit puede ser tan alta como 0,1 pg para objetivos altamente expresados y tan alta como 1 pg para objetivos moderadamente expresados.El kit es adecuado para la amplificación y cuantificación de muestras de ADN.Permite la detección y cuantificación sensible de ácidos nucleicos de diferentes muestras, células y microorganismos de plantas y animales.
Componentes
| No | Nombre | Volumen | Volumen |
| 1 | Búfer avanzado | 250 µL | 2×1,25ml |
| 2 | Mezcla de enzimas avanzada | 20 µl | 200 µL |
| 3 | ARNasa libre H2O | 250 µL | 2×1,25ml |
Condiciones de almacenaje
Este producto debe almacenarse a -25~-15 ℃ protegido de la luz durante 1 año.
Instrucciones
1.Configuración del sistema de reacciónd
| Componentes | Volumen (μL) | Volumen (μL) | Concentración final |
| Búfer avanzado | 12.5 | 25 | 1× |
| Mezcla de enzimas avanzada | 1 | 2 | - |
| Cebador directo (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 µmol/L |
| Cebador inverso (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 µmol/L |
| Tampón de ARNb | X | X | - |
| ARNasa libre H2ohc | a 25 | a 50 | - |
Notas:
1) a.tLa concentración final del cebador fue de 0,2 μmol/L, que también se pudo ajustar entre 0,1 y 1 μmol/L según corresponda.
2) b.El reactivo es extremadamente sensible, con ARN total en el rango de 1 pg-1 μg, y las pruebas de muestras humanas mostraron una entrada óptima de 1 pg-100 ng, controlando un valor Ct general en el rango de 15-30, según corresponda.
3) c.Se recomienda utilizar 20 μl o 50 μl para garantizar la validez y reproducibilidad de la amplificación del gen objetivo.
4) d.Prepárese en el banco ultralimpio y utilice puntas y tubos de reacción libres de residuos de nucleasa;Se recomiendan puntas con cartuchos de filtro.Evite la contaminación cruzada y la contaminación por aerosoles.
2.Programa de reacción
| Paso del ciclo | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Transcripción inversa | 50 ℃a | 6 minutos | 1 |
| Desnaturalización inicial | 95 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Reacción de amplificación | 95 ℃ | 15 seg | 40 |
| 60℃b | 30 segundos | ||
| Etapa de la curva de fusión | Valores predeterminados del instrumento | 1 | |
Notas:
1) a.La temperatura de transcripción inversa se puede seleccionar entre 50 y 55 °C según las necesidades experimentales.Para muestras de ADN, se puede omitir el proceso de transcripción inversa.
2) b.En casos especiales, la temperatura de recocido/extensión se puede ajustar de acuerdo con el valor de Tm del imprimador; se recomienda 60 °C.
Notas
1. Este producto es únicamente para uso en investigación.
2. Por su seguridad, opere con batas de laboratorio y guantes desechables.
