Inhibidor de la ARNasa
El inhibidor de la RNasa murina es un inhibidor de la RNasa murina recombinante expresado y purificado a partir de E. coli.Se une a la ARNasa A, B o C en una proporción de 1:1 mediante enlaces no covalentes, inhibiendo así la actividad de las tres enzimas y protegiendo el ARN de la degradación.Sin embargo, no es eficaz contra RNasa 1, RNasa T1, S1 Nucleasa, RNasa H o RNasa de Aspergillus.El inhibidor de la RNasa murina se probó mediante RT-PCR, RT-qPCR y ARNm de IVT, y fue compatible con varias transcriptasas inversas, ADN polimerasas y ARN polimerasas comerciales.
En comparación con los inhibidores de la RNasa humana, el inhibidor de la RNasa murina no contiene dos cisteínas que son altamente sensibles a la oxidación, lo que provoca la inactivación del inhibidor.Eso lo hace estable a bajas concentraciones de TDT (menos de 1 mM).Esta característica lo hace adecuado para su uso en reacciones donde altas concentraciones de DTT son adversas para la reacción (por ejemplo, RT-PCR en tiempo real).
Aaplicación
Este producto puede usarse ampliamente en cualquier experimento donde sea posible la interferencia de la RNasa para evitar la degradación del ARN, como por ejemplo:
1.Síntesis de la primera hebra de ADNc, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Protege el ARN de la degradación durante la transcripción/traducción in vitro (p. ej., sistema de replicación viral in vitro).
3.Inhibición de la actividad RNasa durante la separación y purificación de ARN.
Condiciones de almacenaje
El producto se puede almacenar a -25 ～- 15 ℃, válido por 2 años.
Búfer de almacenamiento
KCl 50 mM, HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6, 25 ℃), DTT 8 mM y glicerol al 50%.
Definición de unidad
La cantidad de inhibidor de RNasa murina necesaria para inhibir la actividad de 5 ng de ribonucleasa A en un 50% se definió como una unidad (U).
Peso molecular de la proteína.
El peso molecular del inhibidor de la RNasa murina es de 50 kDa.
Control de calidad
exonucleasa Actividad:
40 U de inhibidor de ARNasa murina con 1 μg de ADN digerido con λ -Hind III a 37 ℃ durante 16 horas no producen degradación, según lo determinado mediante electroforesis en gel de agarosa.
Actividad de endonucleasa:
40 U de inhibidor de RNasa murina con 1 μ g de ADN λ a 37 ℃ durante 16 horas no producen degradación, según lo determinado mediante electroforesis en gel de agarosa.
mellando Actividad:
40 U de inhibidor de ARNasa murina con 1 μg de pBR322 a 37 ℃ durante 16 horas no producen degradación, según lo determinado mediante electroforesis en gel de agarosa.
ARNasa Actividad:
40 U de inhibidor de ARNasa murina con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ no producen degradación, según lo determinado mediante electroforesis en gel de agarosa.
E.ADN de coli:
Se analizan 40 U de inhibidor de la ARNasa murina para detectar la presencia de ADN genómico de E. coli utilizando TaqMan qPCR con cebadores específicos para el locus de ARNr 16S de E. coli.La contaminación del ADN genómico de E. coli es ≤ 0,1 pg/40 U.
Nbeneficios según objetivoss
1. La oscilación o agitación violenta provocará la inactivación de la enzima.
2. El rango de temperatura óptimo de este inhibidor fue de 25 a 55 ℃ y se inactivó a 65 ℃ y más.
3. Las actividades de RNasa H, RNasa 1 y RNasa T1 no fueron inhibidas por el inhibidor de RNasa murino.
4. La inhibición de la actividad de la RNasa se encontró en un amplio rango de pH (pH 5-9 fueron todos activos), y la actividad más alta se observó a pH 7-8.
5. Dado que las ribonucleasas normalmente conservan actividad en condiciones desnaturalizantes, se debe tener cuidado para evitar la desnaturalización de las moléculas inhibidoras de la RNasa que se han complejo con una ribonucleasa.Para evitar la liberación de ribonucleasa activa, se deben evitar temperaturas superiores a 50 °C y altas concentraciones de urea u otros agentes desnaturalizantes.
