Bst 2.0 ADN polimerasa (sin glicerol)
La Bst ADN polimerasa V2 se deriva de la ADN polimerasa I de Bacillus stearothermophilus, que tiene actividad ADN polimerasa 5′→3′ y una fuerte actividad de reemplazo de cadena, pero no actividad exonucleasa 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 es ideal para desplazamiento de hebras, amplificación isotérmica LAMP (amplificación isotérmica mediada por bucle) y secuenciación rápida.
Componentes
| Componente | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerasa V2 (sin glicerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 mililitro | 10ml |
| Tampón 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10ml |
Aplicaciones
1.Amplificación isotérmica LAMP
2.Reacción de desplazamiento único de la cadena de ADN
3.Secuenciación del gen GC alto
4.Secuenciación de ADN a nivel de nanogramos.
Condición de almacenamiento
Transporte por debajo de 0 °C y almacenamiento entre -25 °C y -15 °C.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que incorpora 25 nmol de dNTP en un material insoluble en ácido en 30 minutos a 65°C.
Control de calidad
1.Ensayo de pureza de proteínas (SDS-PAGE):La pureza de la Bst ADN polimerasa V2 es ≥99% determinada mediante análisis SDS-PAGE utilizando detección de azul Coomassie.
2.Actividad exonucleasa:La incubación de una reacción de 50 μL que contiene un mínimo de 8 U de Bst ADN polimerasa V2 con 1 μg de ADN digerido λ -Hind Ⅲ durante 16 horas a 37 ℃ no produce degradación detectable según lo determinado.
3.Actividad de Nickase:La incubación de una reacción de 50 µl que contiene un mínimo de 8 U de ADN polimerasa Bst V2 con 1 µg de ADN pBR322 durante 16 horas a 37 °C no produce degradación detectable según lo determinado.
4.Actividad de la ARNasa:La incubación de una reacción de 50 µl que contiene un mínimo de 8 U de ADN polimerasa V2 de Bst con 1,6 µg de ARN MS2 durante 16 horas a 37 °C no produce degradación detectable según lo determinado.
5.ADN de E. coli:Se analizan 120 U de Bst ADN polimerasa V2 para detectar la presencia de ADN genómico de E. coli utilizando TaqMan qPCR con cebadores específicos para el locus de ARNr 16S de E. coli.La contaminación del ADN genómico de E. coli es ≤1 copia.
Reacción de la lámpara
| Componentes | 25µL |
| Tampón 10×HC Bst V2 | 2,5 µL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 µL |
| dNTP (10 mm cada uno) | 3,5 µL |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 µL |
| Mezcla de imprimaciónb | 6 µL |
| Bst ADN Polimerasa V2 (Sin glicerol) (8 U/uL) | 1 µL |
| Plantilla | × µL |
| ddH₂O | Hasta 25 µL |
Notas:
1) a.SYTOTM 16 Verde (25×): Según las necesidades experimentales, se pueden utilizar otros tintes como sustitutos;
2) b.Mezcla de imprimación: obtenida mezclando 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB y otros volúmenes.
Reacción y condición
1 × tampón HC Bst V2, la temperatura de incubación está entre 60 °C y 65 °C.
Inactivación por calor
80 °C, 20 minutos
