Hotstart Taq ADN polimerasa
Hot Start Taq DNA Polymerase (modificación de anticuerpo) es una ADN polimerasa termoestable de arranque en caliente de Thermus acuáticos YT-1, que posee una actividad polimerasa 5′→3′ y una actividad endonucleasa de aleta 5′.La ADN polimerasa Taq de arranque en caliente es una ADN polimerasa Taq modificada por anticuerpos Taq termolábiles.La modificación de anticuerpos aumentó la especificidad, la sensibilidad y el rendimiento de la PCR.
Componentes
| Componente | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Tampón Taq HC 5× | 4×1mL | 4×10 ml | 4×50ml | 5×400ml |
| Hot Start Taq ADN polimerasa (anticuerpo modificado) (5 U/μL) | 0,1 mililitros | 1 mililitro | 5ml | 10×5 ml |
Aplicaciones
Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 a 25 ℃), KCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, ditiotreitol 1 mM, Tween20 al 0,5%, IGEPALCA-630 al 0,5% y glicerol al 50%.
Condición de almacenamiento
Transporte por debajo de 0 °C y almacenamiento entre -25 °C y -15 °C.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que incorpora 15 nmol de dNTP en material insoluble en ácido en 30 minutos a 75°C.
Control de calidad
1.EndActividad de la onucleasa:La incubación de 20 U de enzima con 4 μg de ADN de pUC19 durante 4 horas a 37 ℃ no produjo ninguna degradación detectable del ADN según lo determinado mediante electroforesis en gel.
2.PCR Lambda de 5 kb:25 ciclos de amplificación por PCR de 5 ng de ADN Lambda con 1,25 unidades de ADN polimerasa Taq en presencia de dNTP 200 µM y cebadores 0,2 µM dan como resultado el producto esperado de 5 kb.
3.Actividad exonucleasa:La incubación de una reacción de 50 µl que contiene un mínimo de 12,5 U de ADN polimerasa Taq con 10 nmol de oligonucleótido 5´-FAM durante 30 minutos a 37 ℃ no produce degradación detectable.
4.Actividad de la ARNasa:La incubación de 10 µl de reacción que contenía 20 U de enzima con 1 µg de transcritos de ARN durante 2 horas a 37 °C no produjo degradación detectable del ARN según lo determinado mediante electroforesis en gel.
5.Inactivación por calor:No.
Sistema de reacción
| Componentes | Volumen |
| Plantilla de ADNa | opcional |
| Cebador directo de 10 μM | 0,5 µL |
| Cebador inverso de 10 μM | 0,5 µL |
| Mezcla dNTP (10 mm cada una) | 0,5 µL |
| Tampón Taq HC 5× | 5 µl |
| ADN polimerasa Taqb(5U/μL) | 0,125 µL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 25 µL |
Notas:
1) a.
| ADN | Cantidad |
| genómico | 1 ng-1 μg |
| Plásmido o viral | 1 pg-1 ng |
2) b.La concentración óptima de Taq ADN polimerasa puede oscilar entre 5 y 50 unidades/ml (0,1-0,5 unidades/25 µL de reacción) en aplicaciones especializadas.
Protocolo de ciclado térmico
PCR
| Paso | Temperatura(°C) | Tiempo | Ciclos |
| Desnaturalización iniciala | 95℃ | 1-3 minutos | - |
| Desnaturalización | 95℃ | 15-30 segundos | 30-35 ciclos |
| Recocidob | 45-68℃ | 15-60 segundos | |
| Extensión | 68℃ | 1kb/min | |
| Ampliación definitiva | 68℃ | 5 minutos | - |
Notas:
1) Una desnaturalización inicial de 1 min a 95°C es suficiente para la mayoría de las amplificaciones.Para plantillas difíciles, se recomienda una desnaturalización más larga, de 2 a 3 minutos a 95 °C.Con la PCR de colonias, se recomienda una desnaturalización inicial de 5 minutos a 95 °C.
2) El paso de recocido suele ser de 15 a 60 s.La temperatura de recocido se basa en la Tm del par de cebadores y normalmente es de 45 a 68 ℃.
