2×HiF Taq más mezcla maestra
Número de gato: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (con tinte) es una solución premezclada 2x lista para usar que contiene ADN polimerasa Plus HIF, dNTP y tampón optimizado.Se añaden a la mezcla maestra dos anticuerpos monoclonales a temperatura ambiente que inhiben la actividad polimerasa y la actividad exonucleasa 3′→5′ para una PCR Hot Start fácil y altamente específica.El factor de extensión se agrega a la mezcla maestra para darle a la enzima una capacidad de amplificación de fragmentos largos, la longitud de la amplificación puede ser de hasta 13 kb, la enzima tiene una actividad de ADN polimerasa 5′→3′ y una actividad 3′→5′. Actividad exonucleasa, su fidelidad es 83 veces mayor que la de la ADN polimerasa Taq, que es 9 veces mayor que la de la ADN polimerasa ordinaria.Es adecuado para la amplificación de plantillas complejas; el producto de amplificación es un extremo romo.
2 × HIF Taq plus Master Mix (con tinte) tiene las ventajas de ser rápido y fácil, alta sensibilidad, fuerte especificidad, buena estabilidad, etc., el sistema de reacción solo necesita agregar cebadores y plantillas, y puede amplificarse mediante dos protocolo de pasos, simplificando los pasos experimentales y ahorrando tiempo.Este producto contiene colorantes indicadores de electroforesis y los productos de PCR se pueden utilizar directamente para la electroforesis.Además, el producto también contiene un agente protector específico, de modo que la mezcla maestra pueda mantener una actividad estable después de repetidas operaciones de congelación y descongelación.
Condiciones de almacenaje
Los productos deben almacenarse a -25~-15℃ durante 1 año.
Especificaciones
| Especificaciones del producto | Mezcla maestra |
| Concentración | 2× |
| Arranque en caliente | Arranque en caliente incorporado |
| Sobresalir | Desafilado |
| Velocidad de reacción | Rápido |
| Tamaño (producto final) | Hasta 13kb |
| Condiciones de transporte | Hielo seco |
| Tipo de producto | Premezclas de PCR de alta fidelidad |
Instrucciones
1.Sistema de reacción de PCR
| Componentes | Volumen (μL) |
| Plantilla de ADN | Adecuado |
| Cebador directo (10 μmol/L) | 2.5 |
| Cebador inverso (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq más mezcla maestra | 25 |
| ddH2O | a 50 |
2.Uso recomendado de diferentes plantillas.
| tipo de plantilla | Amplifica fragmentos de 1kb a 10 kb |
| ADN genómico | 50ng-200ng |
| Plásmido o ADN viral | 10pg-20ng |
| ADNc | 1-2,5 µL (No exceda el 10% del volumen final de la reacción de PCR) |
3.Protocolo de amplificación
1) Protocolo de dos pasos (plantilla de complejidad)
| Paso del ciclo | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Desnaturalización inicial | 98 ℃ | 3 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 98 ℃ | 10 segundos | 30-35 |
| Extensión | 68 ℃ | 30 segundos/kb | |
| Prórroga definitiva | 72 ℃ | 5 minutos | 1 |
2) Protocolo de tres pasos (protocolo regular)
| Paso del ciclo | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Desnaturalización inicial | 98 ℃ | 3 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 98 ℃ | 10 segundos | 30-35 |
| Recocido | 60℃ | 20 seg | |
| Extensión | 72 ℃ | 30 segundos/kb | |
| Prórroga definitiva | 72 ℃ | 5 minutos | 1 |
3) Protocolo de gradiente de recocido (plantilla de complejidad)
| Paso del ciclo | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Desnaturalización inicial | 98 ℃ | 3 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 98 ℃ | 10 seg | 15 (Reducción de 1 ℃ por ciclo) |
| Recocido degradado | 70-55 ℃ | 20 seg | |
| Extensión | 72 ℃ | 30 segundos/kb | |
| Desnaturalización | 98 ℃ | 10 seg |
20 |
| Recocido | 55 ℃ | 20 seg | |
| Extensión | 72 ℃ | 30 segundos/kb | |
| Prórroga definitiva | 72 ℃ | 5 minutos | 1 |
Funciones bajo diferentes protocolos de amplificación
| protocolol | Dos pasos | Tres pasos | Recocido degradado |
| Especificaciones. | rápido | medio | lento |
| Especificidad | alto | medio | alto |
| Rendimiento de la PCR | medio | alto | medio |
| Tasa de detección | alto | medio | alto |
Notas
Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
